流式-JC-1

實(shí)驗(yàn)服務(wù) 流式檢測(cè) 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

價(jià)格￥80
單位樣
貨號(hào)HKF6018
品牌浩克

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服務(wù)介紹：

貨號(hào)	名稱	規(guī)格	價(jià)格
HKF6018	流式-JC-1	樣	80

　　一、實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介
　　線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測(cè)線粒體膜電位的熒光探針，可以檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。其原理是，當(dāng)線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中，形成聚合物，488nm激發(fā)時(shí)的最大發(fā)射波長(zhǎng)為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽(yáng)性;當(dāng)線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，488nm激發(fā)時(shí)最大發(fā)射波長(zhǎng)為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖匯總所有細(xì)胞FL1為陽(yáng)性。凋亡細(xì)胞則大多為FL1單陽(yáng)性。不同熒光顏色的轉(zhuǎn)變反應(yīng)線粒體膜電位的變化，常用紅綠熒光的相對(duì)比例衡量線粒體去極化的比例。
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　　二、流式JC-1實(shí)驗(yàn)步驟
　　1、收集細(xì)胞：細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min收集細(xì)胞,棄上清。
　　2、PBS洗滌細(xì)胞：加入3ml 4℃預(yù)冷的PBS完全重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min，棄上清。沉淀震蕩混勻。
　　3、細(xì)胞計(jì)數(shù)：移取10微升在血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞為0.5-1×10^6/ml。
　　4、裝載探針：按照1:500用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋JC-1，使終濃度為10ug/mL。
　　5、孵育探針：37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘，每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸，用無(wú)血清的培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針。
　　6、上機(jī)檢測(cè)：流式細(xì)胞儀使用激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488nm，發(fā)射波長(zhǎng)FL1(Em=525±20nm);FL2(Em=585±20 nm)，用Flow Jo軟件分析結(jié)果。

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