【產(chǎn)品信息】

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	30T	保存	有效期
洗液*5（粉末溶解于2L ddH2O）	HKR12-1	2L*5	短期4℃長期-20℃	12個月
HRP-鼠抗地高辛（100x）	HKR12-2	30uL
TSA顯色液520nm（可選）	HKR12-3	3mL
自動疏水液	HKR12-4	8mL
封閉液	HKR12-5	3mL
16S rRNA Probe	HKR11-6	3mL

【產(chǎn)品簡介】

細菌通用16S rRNA EUBmix探針快速檢測試劑盒，該試劑盒采用EUBmix混合探針（包含EUB338、EUB338-II、EUB338-III等系列探針），可廣譜覆蓋各類細菌的16S rRNA保守區(qū)。其操作流程簡易快速，能顯著縮短實驗時間，特色在于通過多組EUBmix觸發(fā)探針與靶序列特異性結(jié)合后，暴露擴增序列并引發(fā)樹枝狀雜交鏈式反應(yīng)（HCR），形成巨大的核酸聚合物。每條核酸鏈均標記有地高辛（DIG），最終可通過抗體檢測實現(xiàn)顯色可視化，兼顧檢測全面性與高效性。

【探針信息】

EUB26：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

EUB338：GCTGCCTCCCGTAGGAGT

EUB338-II：GCTGCCTCCCAGAGGAGT

EUB338-III：GCTGCCACCCGTAGGTGT

EUB516：ACCAGAAGTAGGTAGTCTG

EUB660：CAACGAGCGCAACCCT

EUB820：ATTAGATACCCTGGTAGTCC

EUB927：AAACTCAAAGGAATTGACGG

EUB927：AAACTCAAATGAATTGACGG

EUB927：AAACTTAAAGGAATTGACGG

EUB927：AAACTTAAATGAATTGACGG

EUB930：AGGAATTGACGGGGGCCCG

EUB1195：GAAAGGAAGGTGGTGATGGC

EUB1387：GCTTGTCTCAAAGATTAAGCC

EUB1401：CGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACG

EUB1522：AAGGAGGTGATCCAGCCAC

【組織固定】

組織類型	動物組織	植物組織	冰凍樣本	細胞爬片	細胞	腸道	miRNA
處理方式	室溫固定12h-24，石蠟包埋。	抽真空固定1h（200mmHg），室溫固定12h-24，石蠟包埋。	15%蔗糖4℃脫水8小時，30%蔗糖4℃脫水8小時，OCT包埋。	4°固定2h左右。換pbs運輸4°。	細胞沉淀，4℃固定2h，換pbs運輸4°，瓊脂糖包埋。	卡諾氏固定液室溫2h，換70%乙醇運輸。	室溫固定120h左右，石蠟包埋。

【儲存與運輸】

冰袋（wet ice）運輸；-20℃長期保存,短期于4℃保存，有效期6個月。

【使用方法】

1.1. 自動疏水

每張切片未脫蠟前，滴加100-200ul的自動疏水液，完全覆蓋組織，自然干燥后進行后續(xù)操作。

注：在脫蠟后，切片上會形成耐高溫疏水圈，和后續(xù)用組畫筆畫疏水圈不沖突。

2. 脫蠟至水

依次將切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-二甲苯Ⅲ15 min-無水乙醇10 min-90%酒精10 min-80%酒精10 min -70%酒精10 min -純水沖洗。

3. 修復(fù)

細胞爬片：用組畫筆畫出大小合適的疏水圈，將100ul低溫修復(fù)液(HKI3002)滴于細胞爬片上，室溫孵育30min，純水洗滌3次每次5min，用3%雙氧水封閉15min。

注：HKI3002可用蛋白酶K 37℃孵育10min替代。

冰凍切片：用組畫筆畫出大小合適的疏水圈，在濕盒中水平放置切片。將100ul防掉片修復(fù)液(HKI3002)滴于組織上，室溫孵育30min，純水洗滌3次每次5min，用3%雙氧水封閉15min。

注：HKI3002可用蛋白酶K 37℃孵育20min替代。

石蠟切片：將裝入玻片的玻片架放入修復(fù)槽，倒入1x檸檬酸6.0修復(fù)液（樣本區(qū)域須被浸沒），蓋上蓋子，用膠帶紙封住，放入微波爐中，中火8min，停8min，中低火8min。自然冷卻降溫后，用3%雙氧水封閉15min。

4. 封閉

取出切片，甩干切片上的液體，用組畫筆畫出大小合適的疏水圈，在原位雜交儀中或濕盒中水平放置切片，每張切片滴加100ul封閉液，室溫孵育30min，洗滌1次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

5. 探針雜交

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的快速探針，37℃孵育2.5h或25℃-37℃孵育過夜，注意保持濕度以防干片。洗滌5次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

6. HRP-鼠抗地高辛

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的HRP-鼠抗地高辛（用免疫組化抗體稀釋液HKI3001稀釋至1x），25℃-37℃濕盒孵育60min；洗滌5次，每次5min。洗滌步驟：將裝入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（樣本區(qū)域須被浸沒），置于搖床上5min，轉(zhuǎn)速為60。

注：HKI3001可用PBS、抗體稀釋液等替代。

7. 顯色

甩干切片上的液體，每張切片滴加100ul的TSA顯色液，室溫孵育10min。純水沖洗，終止反應(yīng)。

8. DAPI染核

每張切片滴加100ul DAPI染液（HKI0005），避光孵育5min，純水沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片（HKI0007-1）。

9. 抗體和FISH共染

當需要抗體和FISH共染時，先孵育一抗、二抗、TSA顯色，顯色完后用抗體洗脫液（HKI0045）處理完切片。之后從步驟4開始做FISH實驗。

【注意事項】

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅作科研用途。

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