【產(chǎn)品簡介】

Haoke^? Quick mycoplasma detection kit by LAMP是一款用于快速檢測細胞培養(yǎng)物中支原體污染的試劑盒。

產(chǎn)品特點：

• 基于等溫擴增技術(shù)，使用簡便快捷，只需65℃孵育1h，即可通過肉眼觀察顏色變化判斷結(jié)果；
• 不需要復(fù)雜儀器，可通過多種途徑即水浴鍋/金屬浴/PCR 儀等輕松完成實驗；
• 性能穩(wěn)定，耐抑制能力強，經(jīng)大量驗證不會出現(xiàn)假陽性；
• 結(jié)果判斷無需開蓋，能夠避免核酸氣溶膠污染；
• 采用Warmstart技術(shù)，可以在室溫配置反應(yīng)體系；

適用范圍：

• 適用于多種細胞類型如懸浮、貼壁細胞，包括常見腫瘤、免疫、原代、干細胞等的檢測；
• 可應(yīng)用于生物醫(yī)藥、疫苗、干細胞等企業(yè)以及常規(guī)科研實驗室中快速檢查是否有支原體污染的情況。

Haoke^? Quick mycoplasma detection kit by LAMP經(jīng)驗證能夠檢測多種支原體類型，包括 95%以上的支原體污染源：Mycoplasma arginini、Mycoplasma orale、Mycoplasma fermentans、Mycoplasma hominis、Mycoplasma hyorhinis 等。

【儲存方式】

-25~-15℃保存。

【使用方法】

操作前注意事項

1. 如果每次實驗用量較少，建議分裝保存，避免反復(fù)凍融和試劑污染；
2. 實驗后，注意擰緊試劑管蓋，避免污染；
3. 請在潔凈環(huán)境下配制試劑；操作人員需要具備良好的無菌操作技能，防止處理過程中引入其他污染；
4. 本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用，不得用于臨床醫(yī)學(xué)診斷及其他非合理用途；

5. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套進行實驗操作。

操作步驟

1. 樣品處理
通常當細胞達到下次傳代或換液時，即可吸取上清進行檢測。若細胞傳代周期短，建議分瓶，1瓶用于正常細胞培養(yǎng)，另外1瓶不傳代不換液，培養(yǎng)細胞至3天以上，此時支原體含量較高，便于檢出。貼壁細胞建議匯合度達到 90%左右。

貼壁細胞取樣：直接吸取上清或消化后吸取細胞懸液。

懸浮細胞取樣：2300 rpm或500 g離心5 min 后吸取上清或直接吸取細胞懸液。

2.反應(yīng)體系配制
將 Haoke^? Quick mycoplasma detection kit by LAMP 從-25~-15℃儲存條件下拿出，恢復(fù)至室溫，混勻后離心。根據(jù)實驗樣品（包括 Positive Control, PC；Negative Control, NC；待測樣品 unk.）數(shù)量配制反應(yīng)體系，每管分裝 19?μL：

【注】：“n”是實驗樣品數(shù)量。

3.加樣
向分裝好的19?μL反應(yīng)體系中加入樣品：

加入樣品后，混勻離心。如果后續(xù)在水浴鍋/金屬浴中反應(yīng)：加入 Mineral oil ，25 μL/管；如果在 PCR 儀中反應(yīng)，反應(yīng)程序中設(shè)置熱蓋 105℃，無需加入 Mineral oil。

4. 反應(yīng)
將儀器溫度設(shè)置成 65℃, ?放入反應(yīng)管，孵育 60 min。

可選步驟：在 65℃反應(yīng)結(jié)束后，增加85℃ 5min， 以滅活 Bst DNA 聚合酶 ，減少氣溶膠污染的可能性。

5. 結(jié)果判斷
反應(yīng)結(jié)束后，立即拿出，在光線良好的條件下觀察管子顏色。優(yōu)先觀察 Negative Control (NC)和 Positive?Control (PC)的顏色，若顏色不正確，則需要查找原因后確定下一步計劃。

紫色： 陰性

藍色： 陽性

【注】：

1.如果顏色介于紫色和藍色之間，可以將反應(yīng)管繼續(xù)65℃條件下延長總反應(yīng)時間至75~90?mins。若依然為中間色，則判斷陰性；若顏色完全變?yōu)樗{色，則判為陽性。
2.?Lamp反應(yīng)會產(chǎn)生大量的核酸，請勿在反應(yīng)結(jié)束后打開管蓋，避免氣溶膠的污染。